武漢P4研究如何增強病毒毒性 大紀元 20220525

【縛雞之論】英文拷到 G / D 找中文翻譯

Although the members of a specific echo chamber might think that the Monkeypox in Europe and elsewhere undoubtedly is from the Level 4 laboratory of the Wuhan Institute of Virology, just as it did in 2019.  It is too early to conclude.
As to the SARS-Cov-2 in 2019, the leak is for sure.  We simply can not be sure: whether the leak happened on purpose or not.  No state can make a policy based on uncertainty.
What bothers me is Beijing's Zero-COVID policy at all costs with a political effect: transforming China from a one-party system into a totalitarian state under one man, which is beneficial to Xi's third term in the coming months.
Similarly, the Monkeypox or H7N9 influenza, if the infection prevails in China, no matter what the cause might be, will legitimize Beijing's Zero-Monkeypox or Zero-H7N9 policy and give Xi the ultimate authority to enter his third term.  Of course, this is a maximum imagination.

雖然在同溫層而言，此事是「一定的」，但就證據而言，還待加強。
至於武漢肺炎，大致上是「一定的」，卻無法分別外洩是：故意的，還是失誤？且，在政治上影響甚大，所以無法成為國家行為的準據。
但我擔心的是中國瘋狂式清零，所具有的政治效應—管控社會以掩護習近平的第三任及之後的連任。但，可管控的猴痘與H7N9疫情，也可能讓中國現行瘋狂式清零具合理性。當然，這是最大的想像。 

EXC: The Infamous Wuhan Lab Recently Assembled Monkeypox Strains Using Methods Flagged For Creating ‘Contagious Pathogens’.

Combined insertion of basic and non-basic amino acids at hemagglutinin cleavage site of highly pathogenic H7N9 virus promotes replication and pathogenicity in chickens and mice

中國想拿猴痘當武器？「五毒俱全」的武漢P4研究如何增強病毒毒性    大紀元 20220525

根據《大紀元時報》《新聞拍案驚奇》專欄今 ( 27 ) 日報導，近期猴痘病毒在世界上傳播，同時還發生了一件怪事，就是一家名為 NTI 、號稱是從事防止核武器和生物武器擴散的機構，在去年的慕尼黑安全會議上，發布了一份模擬推演報告，詳細模擬了猴痘病毒擴散的時間、路徑，和最終造成的危害。

目前猴痘病毒雖然剛散播開不久，但這初始的傳播階段，與這份報告上的極其相似，例如真的是在 5 月份的英國開始傳播，隨後在更多國家發現，這份報告的這種驚人「巧合」，也讓人蠻驚訝的。

《新聞拍案驚奇》指出，有位世界十大藥廠之一公司上班的高級研發主管，涉及的領域包括病毒和疫苗的研究，他爆料，在目前猴痘病毒廣泛散播之前，中國有一組研究人員，就發表過一篇有關如何人工修改猴痘病毒基因，以增強其傳染性的研究報告。

他指出，一般研究者都是研究怎麼降低傳染性或毒性，幾乎沒什麼人去研究要增強傳染性，而且這份報告的作者，又是武漢病毒研究所的幾個人，只不過沒有石正麗。一開始看到這份報告的時候，他表示他們都沒在意，但直到最近猴痘病毒開始散播，才想起當初的那份報告。

此外，有間名為《國家脈搏》（The National Pulse）的美國媒體，在 22 日就報導了這件事，題目是「臭名昭著的武漢實驗室，最近組裝了猴痘病毒毒株」。

文章介紹說道，武毒所這項實驗的論文，有 9 人參與撰寫，今年 2 月發表在《中國病毒學雜誌》（Virologica Sinica）上，這份雜誌主要是介紹世界各地有關病毒的研究。論文闡述的是，2021 年 8 月他們進行的一項功能性研究的最新進展，文章中含有大量醫學專業的術語，這個實驗的目的，簡單來說，就是當時他們發現，猴痘病毒已經在世界各地感染人類了，但是中國還沒出現過，他們似乎還沒有獲得這種猴痘病毒的毒株，所以他們就使用 E9L 基因，是一種 DNA 聚合酶，還有一種 C3L 的基因，是一種補體結合蛋白，這兩種基因，被認為是猴痘病毒或任何正痘病毒的兩個相當有價值的 qPCR 靶標。

武漢實驗市的這些科學家們主要用這兩個東西，憑藉對猴痘病毒已有的一些知識，人工 DIY 組裝出了「猴痘病毒」基因組片段的一部分，按報告顯示，只有原本基因組片段的不到三分之一，所以報告說這幾乎消除了任何使其成為傳染性病毒的風險，他們聲稱組裝出這個東西說這是為了檢測「猴痘病毒」做的研究。

《國家脈搏》稱，意思就是他們組裝出一個類似猴痘病毒的東西，作為 qPCR 檢測的一種參考模板，為病毒檢測而用。在報告中，他們用英文縮寫 MPXV 來表示猴痘病毒，並說這是一種更具致病性的病毒，並且已經在世界各地感染人類，說明他們已經知道這種病毒的危害，並且有可能在世界上廣泛傳播的風險。

按照武毒所的公開報告，是沒有講到給猴痘病毒做改造使其更有傳染力，但同樣這家《國家脈搏》，在今年 19 日報導說道，武毒所還發表了另一份研究報告，是通過人為操縱，使 H7N9 病毒這種甲型流感病毒，更具殺傷力和傳染性。

相應的武毒所的論文，也是發表在 2 月份的一期《中國病毒學雜誌》（Virologica Sinica）上，報告主要闡述的內容是，研究人員如何催生出了六種 H7N9 病毒，以分析各種胺基酸如何改變病毒的毒力和傳染性。

報告說，他們在禽類和哺乳動物的細胞中，進行了病毒複製、熱穩定性和酸穩定性，切割效率，小鼠和雞的致病性和傳播性方面，等等這方面的實驗，對他們重組後的病毒進行了了解。其中他們研究出的 H7N9 變體，讓實驗室中的小鼠致死率，達到了 35 %。實驗的一個結論還提到，給 H7N9 病毒基因，插入某種非鹼性胺基酸，可以對人類構成潛在威脅。

以上兩份武毒所的最新報告，一個是製作 H7N9 甲型流感病毒的變體，使其更具傳染性，另一個，是人工合成了一部分猴痘病毒的基因片段，用於 PCR 檢測的研究。《國家脈搏》透過這兩份報告及相關的報導，能歸納以下兩個要點 :

第一，經歷了武漢的病毒大爆發，還有持續至今的疫情，被廣泛質疑的武漢P4實驗室 ( 武毒所 ) 並沒有任何收斂，還是在公然進行著各種研究。

第二，儘管現在還沒有直接的指控，但是他們做的這些研究都很危險，例如以上的兩個研究，一個是自己組裝危險病毒，自己沒有毒株就要動手造，太令人匪夷所思；另一個更是令人細思極恐，就像那位研發主管說的，別人都是研究怎麼減輕病毒的傳染，這武毒所卻在研究怎麼加強病毒的傳染力，這個該如何解釋，會令外界憂心和質疑。

有網友就調侃說，這「武毒所」，真的是「五毒俱全」。《新聞拍案驚奇》表示，在目前病毒疫情還在中國大陸繼續「清零」的同時，中國真的不擔心他們的實驗在哪個環節出問題，給中國社會、乃至全人類帶來另一次危機嗎？目前正在流行的病毒，就已經有不少聲音質疑是不是武毒所出的問題，而在 2000 年代，中國大陸也發生過確認的 SARS 病毒洩漏，造成公眾恐慌，這些都是教訓，但是至今仍在做這些研究。

 

 

Transformation-associated recombination (TAR) has been widely used to assemble large DNA constructs. One of the significant obstacles hindering assembly efficiency is the presence of error-prone DNA repair pathways inyeast, which results in vector backbone recircularization or illegitimate recombination products. To increase TAR assembly efficiency, we prepared a dual-selective TAR vector, pGFCS, by adding a PADH1-URA3 cassette to a previously described yeast-bacteria shuttle vector, pGF, harboring a PHIS3–HIS3 cassette as a positive selectionmarker. This new cassette works as a negative selection marker to ensure that yeast harboring a recircularized vector cannot propagate in the presence of 5-uoroorotic acid. To prevent pGFCS bearing ura3 from recombining with endogenous ura3-52 in the yeast genome, a highly transformable Saccharomyces cerevisiae strain, VL6-48B,was prepared by chromosomal substitution of ura3-52 with a trans gene conferring resistance to blasticidin. A55-kb genomic fragment of monkeypox virus encompassing primary detection targets for quantitative PCR was assembled by TAR using pGFCS in VL6-48B. The pGFCS-mediated TAR assembly showed a zero rate of vector recircularization and an average correct assembly yield of 79% indicating that the dual-selection strategy provides an efcient approach to optimizing TAR assembly.

轉化相關重組 (TAR) 已廣泛用於組裝大型 DNA 構建體。阻礙組裝效率的重大障礙之一是酵母中存在容易出錯的 DNA 修復途徑，這會導致載體骨架再環化或非法重組產物。為了提高 TAR 組裝效率，我們通過將 PADH1-URA3 盒添加到先前描述的酵母-細菌穿梭載體 pGF 中製備雙選擇性 TAR 載體 pGFCS，該載體含有 PHIS3-HIS3 盒作為陽性選擇標記。這種新的盒式磁帶可用作陰性選擇標記，以確保含有再循環載體的酵母不能在 5-氟乳清酸存在下繁殖。為了防止攜帶 ura3 的 pGFCS 與酵母基因組中的內源性 ura3-52 重組，通過用賦予殺稻瘟素抗性的轉基因的 ura3-52 的染色體取代來製備高度可轉化的釀酒酵母菌株 VL6-48B。猴痘病毒的 A55-kb 基因組片段包含定量 PCR 的主要檢測目標，通過 TAR 使用 VL6-48B 中的 pGFCS 進行組裝。 pGFCS 介導的 TAR 組裝顯示載體再環化率為零，平均正確組裝率為 79%，表明雙重選擇策略提供了優化 TAR 組裝的有效方法。

 

Combined insertion of basic and non-basic amino acids at hemagglutinin cleavage site of highly pathogenic H7N9 virus promotes replication and pathogenicity in chickens and mice

Abstract: Since mid-2016, the low pathogenic H7N9 influenza virus has evolved into a highly pathogenic (HP) phenotype in China, raising many concerns about public health and poultry industry. The insertion of a “KRTA” motif at hemagglutinin cleavage site (HACS) occurred in the early stage of HP H7N9 variants. During the co-circulation, the HACS of HP-H7N9 variants were more polymorphic in birds and humans. Although HP-H7N9 variants, unlike the H5 subtype virus, exhibited the insertions of basic and non-basic amino acids, the underlying function of those insertions and substitutions remains unclear. The results of bioinformatics analysis indicated that the PEVPKRKRTAR/G motif of HACS had become the dominant motif in China. Then, we generated six H7N9 viruses bearing the PEIPKGR/G, PEVPKGR/G, PEVPKRKRTAR/G, PEVPKGKRTAR/G, PEVPKGKRIAR/G, and PEVPKRKRR/G motifs. Interestingly, after the deletion of threonine and alanine (TA) at HACS, the H7N9 viruses manifested decreased thermostability and virulence in mice, and the PEVPKRKRTAR/G-motif virus is prevalent in birds and humans probably due to its increased transmissibility and moderate virulence. By contrast, the insertion of non-basic amino acid isoleucine and alanine (IA) decreased the transmissibility in chickens and virulence in mice. Remarkably, the I335V substitution of H7N9 virus enhanced infectivity and transmission in chickens, suggesting that the combination of mutations and insertions of amino acids at the HACS promoted replication and pathogenicity in chickens and mice. The ongoing evolution of H7N9 increasingly threatens public health and poultry industry, so, its comprehensive surveillance and prevention of H7N9 viruses should be pursued.

自 2016 年年中以來，低致病性 H7N9 流感病毒在中國已演變為高致病性 (HP) 表型，引發了公共衛生和家禽業的諸多擔憂。在血凝素切割位點 (HACS) 插入“KRTA”基序發生在 HP H7N9 變體的早期階段。在共同循環期間，HP-H7N9 變體的 HACS 在鳥類和人類中具有更多的多態性。儘管與 H5 亞型病毒不同，HP-H7N9 變體表現出鹼性和非鹼性氨基酸的插入，但這些插入和替換的潛在功能仍不清楚。生物信息學分析結果表明，HACS的PEVPKRKRTAR/G基序已成為中國的優勢基序。然後，我們生成了六種帶有 PEIPKGR/G、PEVPKGR/G、PEVPKRKRTAR/G、PEVPKGKRTAR/G、PEVPKGKRIAR/G 和 PEVPKRKRR/G 基序的 H7N9 病毒。有趣的是，在 HACS 刪除蘇氨酸和丙氨酸 (TA) 後，H7N9 病毒在小鼠中表現出降低的熱穩定性和毒力，而 PEVPKRKRTAR/G 基序病毒在鳥類和人類中普遍存在，這可能是由於其增加的傳播性和中等毒力。相比之下，非鹼性氨基酸異亮氨酸和丙氨酸 (IA) 的插入降低了雞的傳染性和小鼠的毒力。值得注意的是，H7N9 病毒的 I335V 替代增強了雞的感染性和傳播性，這表明 HACS 中氨基酸的突變和插入的組合促進了雞和小鼠的複制和致病性。 H7N9 的持續演變對公共衛生和家禽業的威脅越來越大，因此，應開展其對 H7N9 病毒的全面監測和預防。